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选择培养基如何使用
添加时间2017-10-20 03:30     浏览次数

  以前大部分实验室都是用干粉培养基,但配制过程就较为繁琐,要溶解、调pH值,过滤,过程中可能会产生一些浓度误差,而且有些实验室的水质并不理想,所以培养的效果会有差异。以下内容是小编为您精心整理的选择培养基如何使用,欢迎参考!

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  选择培养基如何使用

  细胞培养是实验室里最常见和最基本的实验了,但却不是最简单的。别小看细胞培养,这里可蕴含着大学问。有时候细胞状态不好,转染、药筛这些实验根本就没办法做。影响细胞培养的因素很多,让我们先从培养基和血清说起。

  ◆ MEM是由Eagle’s基础培养基(BME)发展而来的,其中增加了组分的范围及浓度。

  ◆ 改良的BEM(DMEM)培养基是为小鼠成纤维细胞设计的,现在常用于贴壁细胞的培养。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍,维生素浓度是MEM的4倍,采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。最初的配方中葡萄糖含量为1000 mg/L,后来为了某些细胞的生长需要,将葡萄糖含量又调整为4500 mg/L,这就是大家常说的低糖和高糖了。

  ◆ aMEM含有附加的氨基酸、维生素以及核苷和脂肪酸,它可广泛应用于各种细胞类型,包括对营养成分要求苛刻的细胞。

  ◆ Ham’s F12是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的,现在也广泛应用于克隆形成率的分析及原代培养。F12还可以与DMEM等体积混合使用,得到一种高浓度与成分多样化相结合的产物,这种培养基已应用于许多原代培养及更难养的细胞系的培养。

  ◆ RPMI 1640培养基是专为淋巴细胞培养而设计的,现在已广泛应用于悬浮细胞的培养。

  准备几种培养基,然后花大约两周的时间做一个简单的细胞生长实验,来选择其中最适合的。

  以前大部分实验室都是用干粉培养基,但配制过程就较为繁琐,要溶解、调pH值,过滤,过程中可能会产生一些浓度误差,而且有些实验室的水质并不理想,所以培养的效果会有差异。

  常见培养基有:

  1、细菌培养基

  配方一 牛肉膏琼脂培养基

  牛肉膏0.3克 ,蛋白胨1.0克,氯化钠 0.5克,琼脂 1.5克,水 100毫升

  在烧杯内加水100毫升,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠,用蜡笔在烧杯外作上记号后,放在火上加热.待烧杯内各组分溶解后,加入琼脂,不断搅拌以免粘底.等琼脂完全溶解后补足失水,用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2~7.6,分装在各个试管里,加棉花塞,用高压蒸汽灭菌30分钟.

  配方二 马铃薯培养基

  取新鲜牛心(除去脂肪和血管)250克,用刀细细剁成肉末后,加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨.在烧杯上做好记号,煮沸,转用文火炖2小时.过滤,滤出的肉末干燥处理,滤液pH值调到7.5左右.每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心,灭菌,备用.

  配方三 根瘤菌培养基

  葡萄糖 10克 磷酸氢二钾 0.5克

  碳酸钙 3克 硫酸镁 0.2克

  酵母粉 0.4克 琼脂 20克

  水 1000毫升 1%结晶紫溶液 1毫升

  先把琼脂加水煮沸溶解,然后分别加入其他组分,搅拌使溶解后,分装,灭菌,备用.

  2、放线菌培养基

  配方一 淀粉琼脂培养基(高氏培养基)

  可溶性淀粉 2克 硝酸钾 0.1克

  磷酸氢二钾 0.05克 氯化钠 0.05克

  硫酸镁 0.05克 硫酸亚铁 0.001克

  琼脂 2克 水 100毫升

  先把淀粉放在烧杯里,用5毫升水调成糊状后,倒入95毫升水,搅匀后加入其他药品,使它溶解.在烧杯外做好记号,加热到煮沸时加入琼脂,不停搅拌,待琼脂完全溶解后,补足失水.调整pH值到7.2~7.4,分装后灭菌,备用.

  配方二 面粉琼脂培养基

  面粉 60克 琼脂 20克

  水 1000毫升

  把面粉用水调成糊状,加水到500毫升,放在文火上煮30分钟.另取500毫升水,放入琼脂,加热煮沸到溶解后,把两液调匀,补充水分,调整pH值到7.4,分装,灭菌,备用.

  3、真菌培养基

  配方一 萨市(Sabouraud’s)培养基

  蛋白胨 10克 琼脂 20克

  麦芽糖 40克 水 1000毫升

  先把蛋白胨、琼脂加水后,加热,不断搅拌,待琼脂溶解后,加入40克麦芽糖(或葡萄糖),搅拌,使它溶解,然后分装,灭菌,备用.

  本培养菌是培养许多种类真菌所常用的.

  配方二 马铃薯糖琼脂培养基

  把马铃薯洗净去皮,取200克切成小块,加水1000毫升,煮沸半小时后,补足水分.在滤液中加入10克琼脂,煮沸溶解后加糖20克(用于培养霉菌的加入蔗糖,用于培养酵母菌的加入葡萄糖),补足水分,分装,灭菌,备用.

  把这培养基的pH值调到7.2~7.4,配方中的糖,如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌.

  配方三 黄豆芽汁培养基

  黄豆芽 100克 琼脂 15克

  葡萄糖 20克 水 1000毫升

  洗净黄豆芽,加水煮沸30分钟.用纱布过滤,滤液中加入琼脂,加热溶解后放入糖,搅拌使它溶解,补足水分到1000毫升,分装,灭菌,备用.

  把这培养基的pH值调到7.2~7.4,可用来培养细菌和放线菌.

  配方四 豌豆琼脂培养基

  豌豆 80粒 琼脂 5克

  水 200毫升

  取80粒干豌豆加水,煮沸1小时,用纱布过滤后,在滤液中加入琼脂,煮沸到溶解,分装,灭菌,备用.

  4、食用菌菌种培养基

  配方一 马铃薯—蔗糖--琼脂培养基

  20%马铃薯煮汁 1000毫升

  蔗糖 20克 琼脂 18克

  把马铃薯洗净去皮后,切成小块.称取马铃薯小块200克,加水1000毫升,煮沸20分钟后,过滤.在滤汁中补足水分到1000毫升,即成20%马铃薯煮汁.在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖,煮沸,使它溶解后,补足水分,分装,灭菌,备用.使用该培养基对pH值要求不严格,可以不测定.

  配方二 综合马铃薯培养基

  20%马铃薯煮汁 1000 毫升

  磷酸二氢钾 3克 硫酸镁 1.5克

  葡萄糖 20克 维生素 10毫克

  琼脂 18克

  先配制20%马铃薯煮汁,方法同上.在煮汁中加入上述各种组分,加热溶解后补足水分,调整pH值到6.分装,灭菌,备用. 该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种.

  5.烟草的培养基

  在植物组织培养时,通过调节IAA和CTK的比值能影响愈伤组织分化出根或芽.CTK/IAA高时,愈伤组织分化芽。

  CTK/IAA低时,分化根;CTK/IAA比例适中维持愈伤组织不分化。

  愈伤组织诱导培养基制备。

  以MS培养基母液为基础,向洁净铝锅中顺序加入大量元素20×母液100mL,微量元素100×母液20mL,铁盐100×母液20mL ,维生素100×母液20mL,肌醇200×母液10mL,甘氨酸200×母液10mL,配制得MS培养基后,再加入0.5mg·L-1的BA8mL,0.5mg·L-1的NAA8mL.然后加入实际配制培养基体积约2/3-3/4的蒸馏水,加入40g蔗糖后搅拌使其溶化,用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl调整pH值至5.8-6.0.加入14g琼脂,将铝锅置于电炉上,搅拌加热使琼脂完全溶化,然后用蒸馏水定容至终体积2L,继续加热几分钟使之混合均匀后分装于三角瓶中.

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